在细胞培养中控制的许多变量中,一个特定的变量会影响整个实验:污染。细胞污染的一个影响因素并不总是在雷达上,尽管它可以默默地影响细胞健康并影响测量数据,但它是移液污染。
在设计实验时,移液器、移液器吸头和移液程序的选择很少受到关注。即使是避免移液污染的一揽子解决方案(高压灭菌)也可能不像通常认为的那样有效。
细胞培养的第一条规则:避免污染。为什么无菌技术对于成功的细胞培养如此重要?
无菌技术是获得可靠和可重复结果的唯一方法。污染会影响细胞生长、新陈代谢和健康——这正是科学家们有兴趣研究的东西。受污染的细胞系不具有所需的特性,并且它们每次的功能都不同,具体取决于污染的严重程度。此外,如果污染物使您感兴趣的细胞过度生长,您最终可能会研究错误的生物体。
科学家经常遇到哪些类型的污染物?
常见的污染源是细菌、酵母菌和霉菌。在细胞培养工作中,最难检测和根除的就是支原体。不太常见的污染类型包括,例如,实验室消耗品中的塑料可浸出物。
细胞污染的常见原因有哪些?
污染的常见来源是不良的移液操作,例如使用受污染的移液器和非过滤器吸头。此外,缺乏良好的实验室实践也是一个问题,例如,对培养箱或层流柜等仪器的去污不充分。要去除支原体,需要使用 0.1 µm 而不是 0.2 µm 过滤器进行过滤。
三种移液污染:
1. 移液器到样品污染: 移液器或移液器吸头污染了样品。
如何避免:
使用经过消毒的过滤芯吸头,以防止移液器主体受到污染。
每次样品后更换移液器吸头。
定期用乙醇对移液器进行高压灭菌或消毒。选择与高压灭菌器兼容的移液器。
2. 样品到移液器污染:移液 样品进入移液器主体,污染移液器。
如何避免:
使用过滤器吸头或正位移吸头防止样品进入移液器主体。
移液时,将移液器保持在垂直位置。将移液器竖直存放。
移液时倾斜瓶子。
缓慢松开按钮,避免样品飞溅进入移液器。选择配备软弹出功能的移液器。
3. 样品间污染: 残留的移液样品被转移到下一个样品。通常在多次使用相同的吸头时发生。
如何避免:
每次样品后更换移液器吸头。
使用过滤器吸头或正位移吸头防止样品进入移液器主体,并进入下一个样品。
确保移液器吸头在移液器上密封,以避免样品泄漏。例如, 云顶国际医疗的吸头。
有没有科学家甚至可能不知道的污染因素?
高压灭菌的效率通常不会得到验证,如果高压灭菌器不能正常工作,高压灭菌的移液器吸头可能不是无菌的。包裹在保护包装中的预灭菌过滤嘴是防止此类意外的最安全选择。定期对优质移液器吸头的预灭菌过程进行验证,以确保预灭菌的效率。
移液和分液工具如何使科学家能够在无菌环境中更轻松地处理样品?
选择正确的移液器和移液器吸头可以使无菌工作流程变得更加容易。云顶国际医疗移液器易于清洁和无需工具即可打开,从而加快了日常清洁。由于高压灭菌比用乙醇擦拭更有效地去除污染,赛多利斯机械移液器完全可高压灭菌,这意味着您可以可靠地对移液器进行净化。软吸头弹出可防止吸头弹出时飞溅引起的潜在污染风险。预先灭菌的过滤器吸头可保护您的样品免受交叉污染。云顶国际医疗吸头也采用防漏包装,这意味着储存和交付条件下的任何污染都不会接触到吸头或吸头盒。
科学家如何避免污染?您对无菌工作有哪些重要建议?
首先,良好的实验室实践和对工作步骤的仔细规划。确保仅将特定工作流程所需的东西保留在层流柜中,并同时使用一种细胞培养物。此外,定期检测支原体等污染物可让您高枕无忧,相信您的结果。在无菌条件下工作时,花在预先消毒的滤芯吸头和无菌试剂上的钱是物有所值的。
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